• 9 czerwca, 2022

Ilościowe badanie Golgiego nad morfologią dendrytyczną w średnich neuronach kolczastych prążkowia myszy.

W tym badaniu przedstawiliśmy szczegółową ilościową analizę morfologiczną średnich neuronów kolczastych (MSN) w prążkowiu grzbietowym myszy i określiliśmy zgodność wartości pomiędzy trzema grupami zwierząt uzyskanych w różnych zestawach eksperymentów. Drzewa dendrytyczne 162 aparatów Golgi Cox ( zestaw FD  Rapid  GolgiStain  Kit ) impregnowanych MSN od 15 dorosłych myszy C57BL/6 zrekonstruowano trójwymiarowo za pomocą oprogramowania Neurolucida, a parametry morfologii dendrytycznej porównano między grupami doświadczalnymi. Parametry długości i wzoru rozgałęzień nie wykazywały statystycznie istotnej różnicy i były wysoce spójne między grupami.
Średnia powierzchnia neuronalnej somy wynosiła od 160 μm2 do 180 μm2, a komórki miały 5-6 pierwotnych dendrytów z blisko 40 segmentami na neuron. Analiza Sholla potwierdziła regularność rozgałęzień dendrytycznych. Całkowita długość dendrytów wynosiła około 2100 µm, przy średniej długości poszczególnych odgałęzień (pośrednich) około 22 µm, a końcowej około 100 µm. Mimo że każda grupa eksperymentalna przeszła ten sam, ściśle określony protokół w zakresie preparacji tkanek i barwienia aparatu Golgiego, stwierdziliśmy niespójność objętości dendrytów i powierzchni somy.
Na te zmiany można było wpłynąć metodologicznie podczas procedury Golgiego, chociaż bez wpływu na długość dendrytów i złożoność drzewa. Ponieważ aktywność neuronalna wpływa na grubość dendrytów, nie można było wykluczyć, że obserwowana niespójność objętości była związana ze stanami funkcjonalnymi neuronów przed uśmierceniem zwierząt. Dostarczone tutaj kompleksowe analizy złożoności drzew i długości dendrytów mogą posłużyć jako dodatkowe narzędzie do zrozumienia zmienności morfologicznej w najliczniejszej populacji neuronów prążkowia. Jako wartości odniesienia mogą stanowić podstawę do porównań z wynikami uzyskanymi w badaniach, w których do wyjaśniania różnych stanów patologicznych, w których występują MSN, wykorzystuje się różne modele genetycznie zmodyfikowanych myszy.

Ustalenie zoptymalizowanego protokołu dla metody mikroskopii elektronowej Golgiego w oparciu o procedurę barwienia Golgiego-Coxa przy użyciu komercyjnego  zestawu .

Wprowadzenie zestawu  FD  Rapid  GolgiStain  Kit  umożliwiło wielu badaczom łatwe badanie morfologii neuronów. Dzięki ulepszonej metodzie impregnacji Golgi-Cox, przy użyciu tego  zestawu można uzyskać zarówno stabilne, jak i bardzo czułe barwione obrazy neuronów . Aby szczegółowo przeanalizować mikrostruktury, takie jak kolce dendrytyczne i stożki wzrostu, staraliśmy się stworzyć użyteczną metodę łączącą barwienie Golgiego-Coxa i mikroskopię elektronową (metoda Golgiego-EM), tak aby przygotowane  próbki barwione Kit były odpowiednie do zastosowania w mikroskopii elektronowej (EM) badania.
Wyniki niniejszego badania sugerują znaczenie etapu wiązania aldehydem glutarowym w metodzie Golgiego-EM. Tutaj przedstawiamy zalecany protokół dla metody Golgiego-EM, który jest dostępny dla ultrawysokonapięciowej mikroskopii elektronowej i transmisyjnej mikroskopii elektronowej. Jesteśmy przekonani, że nasza metoda Golgiego-EM może stać się niezawodną i ważną metodą, która może przyczynić się do nowych odkryć w morfologii neuronów.

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany.